ขั้นตอนการดำเนินการทำหมันเอทิลีนออกไซด์

(1) ตามข้อกำหนดการทดสอบเตรียมการระงับสปอร์และชิ้นแบคทีเรียของ Bacillus subtilis var subtilis var. ไนเจอร์ ชิ้นส่วนแบคทีเรียถูกปิดผนึกในถุงพลาสติกโพลีเอทิลีนสองชั้น, 2 ชิ้นต่อถุง . 20 ถุงใช้สำหรับการทดสอบแต่ละครั้ง
(2) ตั้งหนึ่งจุดในชั้นด้านในกลางและชั้นนอกของเครื่องฆ่าเชื้อรวมทั้งหมด 9 คะแนน วางถุงหนึ่งถุงไว้ตรงกลางของแต่ละจุดรวม 18 ถุงทดสอบชิ้นแบคทีเรีย วางถุงอีกใบ (2 ชิ้น) ของชิ้นแบคทีเรียที่อุณหภูมิห้องเป็นตัวควบคุมเชิงบวก
(3) ทำการฆ่าเชื้อเอทิลีนออกไซด์ภายใต้สภาวะการโหลดเต็มรูปแบบตามความเข้มข้นของเอทิลีนออกไซด์เวลาปฏิบัติการอุณหภูมิและความชื้นสัมพัทธ์ในตู้ที่ระบุในคู่มือการใช้งาน โหลดเต็มขึ้นอยู่กับวัตถุประสงค์ของเครื่องฆ่าเชื้อ หลังการรักษานำชิ้นส่วนแบคทีเรียถ่ายโอนไปยังอาหารเลี้ยงน้ำซุปสารอาหาร 5 มล. และเพาะเลี้ยงในศูนย์บ่มเพาะ 37 องศา สังเกตผลลัพธ์สุดท้ายหลังจาก 7 วัน (การทดสอบวัฒนธรรมเชิงคุณภาพ)
สำหรับท่อน้ำซุปสารอาหารที่มีผลลัพธ์ที่ยากต่อการตัดสินใช้การระงับ 0.2 มล. และฉีดวัคซีนสารอาหารวุ้น ใช้แท่ง L ที่ผ่านการฆ่าเชื้อเพื่อแพร่กระจายอย่างสม่ำเสมอและวางในศูนย์บ่มเพาะ 37 องศาสำหรับวัฒนธรรม หลังจาก 48 ชั่วโมงให้เปื้อนรอยเปื้อนและสังเกตสัณฐานวิทยาของอาณานิคมภายใต้กล้องจุลทรรศน์หรือทำการทดสอบอื่น ๆ เพื่อตรวจสอบว่ามีการเจริญเติบโตหรือไม่หรือการเจริญเติบโตเป็นแบคทีเรียทดสอบ หากไม่ใช่แบคทีเรียทดสอบการทดสอบควรทำซ้ำ
(4) ในระหว่างการทดสอบกลุ่มควบคุมเชิงบวกเชิงคุณภาพและเชิงปริมาณและกลุ่มควบคุมเชิงลบควรได้รับการตั้งค่าในเวลาเดียวกัน
(5) สำหรับกลุ่มควบคุมเชิงบวกเชิงปริมาณให้วางชุดการทดสอบชิ้นแบคทีเรียที่อุณหภูมิห้อง หลังจากกลุ่มทดสอบการฆ่าเชื้อหรือการฆ่าเชื้อมาถึงเวลาดำเนินการที่ระบุวางชิ้นส่วนแบคทีเรียสองชิ้นในหลอดทดสอบที่มี 5.0 มล. PBS และเขย่าแต่ละชิ้น 80 ครั้ง ใช้น้ำยาล้างและนับวัฒนธรรมแบคทีเรียที่มีชีวิตตามวิธีที่แสดงใน 2.1.1.3
(6) สำหรับกลุ่มควบคุมเชิงบวกเชิงคุณภาพให้วางชิ้นแบคทีเรียทดสอบจากชุดเดียวกันที่อุณหภูมิห้อง หลังจากกลุ่มทดสอบการทำหมันมาถึงเวลาดำเนินการที่ระบุทันทีฉีดวัคซีน 2 ของชิ้นแบคทีเรียลงในสื่อน้ำซุปสารอาหาร 5.0 มล. วางไว้ในศูนย์บ่มเพาะสำหรับการเพาะเลี้ยงเชิงคุณภาพและสังเกตว่ามีการเจริญเติบโตของแบคทีเรียหรือไม่
(7) สำหรับกลุ่มควบคุมเชิงลบฉีดวัคซีน 2 ชิ้นตัวอย่างที่ไม่มีการปนเปื้อนจากชุดเดียวกันเป็น 5.0 มล. ของสารอาหารน้ำซุปสารอาหารและวางสื่อน้ำซุปสารอาหารที่ไม่ได้รับการควบคุมในศูนย์บ่มเพาะสำหรับการเพาะเลี้ยงเชิงคุณภาพเพื่อสังเกตว่ามีการเจริญเติบโตของแบคทีเรียหรือไม่
(8) การทดสอบซ้ำ 5 ครั้ง
(9) ในการทดสอบ 5 ครั้งการนับแบคทีเรียที่กู้คืนของชิ้นแบคทีเรียควบคุมเชิงบวกควรอยู่ระหว่าง 5 × 10 CFU/Slice และ 5 × 10 CFU/Slice; กลุ่มควบคุมเชิงบวกเชิงคุณภาพควรมีการเจริญเติบโตของแบคทีเรียที่ดี และการควบคุมเชิงลบไม่ควรมีการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย หากผลลัพธ์การควบคุมเชิงบวกหรือเชิงลบไม่เป็นไปตามข้อกำหนดข้างต้นการทดสอบจะไม่ถูกต้องและทำซ้ำ
กฎระเบียบการประเมินผล
ในการทดสอบการทำหมันห้าครั้งกลุ่มควบคุมเชิงบวกเชิงปริมาณในการทดสอบแต่ละครั้งมีจำนวนแบคทีเรียที่ตรวจพบและกู้คืนได้ที่ 5 × 10 CFU/ชิ้นส่วนถึง 5 × 10 CFU/ชิ้น; กลุ่มควบคุมเชิงบวกเชิงคุณภาพมีการเติบโตของแบคทีเรียที่ดี การควบคุมเชิงลบไม่ควรมีการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย เมื่อชิ้นส่วนแบคทีเรียทดสอบทั้งหมดไม่มีการเจริญเติบโตของแบคทีเรียการทำหมันจะถือว่ามีคุณสมบัติ
ข้อควรระวัง
(1) อุณหภูมิและความชื้นสัมพัทธ์มีอิทธิพลอย่างมากต่อผลการฆ่าเชื้อของก๊าซเอทิลีนออกไซด์ดังนั้นเงื่อนไขที่เกี่ยวข้องในการทดสอบควรได้รับการควบคุมอย่างเคร่งครัด
(2) ของเหลวเอทิลีนออกไซด์สามารถละลายโพลีเอทิลีน, โพลีไวนิลคลอไรด์ ฯลฯ และของเหลวไม่ควรหยดลงในรายการดังกล่าว เอทิลีนออกไซด์ไม่ว่าจะเป็นของเหลวหรือก๊าซสามารถทำลายผลิตภัณฑ์เซลลูลอยด์ได้ดังนั้นควรใช้ความระมัดระวังในระหว่างการทดสอบ
(3) เอทิลีนออกไซด์ไวไฟและระเบิด ควรใช้มาตรการป้องกันไฟและการระเบิดที่สถานที่ดำเนินการและไม่อนุญาตให้ใช้เปลวไฟและประกายไฟไฟฟ้า
(4) การสูดดมก๊าซเอทิลีนออกไซด์ที่มากเกินไปอาจทำให้เกิดอาการพิษเช่นอาการปวดศีรษะและอาเจียนและในกรณีที่รุนแรงอาจทำให้เกิดอาการบวมน้ำที่ปอด สภาพแวดล้อมการทำงานควรมีการระบายอากาศที่ดี ในระหว่างวันทำงาน 8 ชั่วโมงความเข้มข้นของเอทิลีนออกไซด์ไม่ควรเกิน 1.82 mg/m3 (1 ppm) และความเข้มข้นของการได้รับแสงในระหว่างการทำงาน 15 นาทีไม่ควรเกิน 9.1 mg/m3 (5.0 ppm) หากอาการพิษเกิดขึ้นให้ออกจากที่เกิดเหตุทันที สำหรับกรณีที่ไม่รุนแรงสูดอากาศบริสุทธิ์จนกว่าอาการจะหายไป สำหรับกรณีที่รุนแรงส่งไปโรงพยาบาลเพื่อรับการรักษาในเวลา